Получение первой личинки европейского угря

Текущий протокол индуцированного созревания самок европейского угря состоит из долгосрочных еженедельных инъекций экстракта гипофиза карпа или лосося (C / S PE) для стимуляции роста ооцитов, однократной бустерной инъекции PE и однократной инъекции 17α, 20β-дигидрокси-4 -прегнен-3-один (DHP) для стимуляции созревания ооцитов и овуляции. Однако качество яицеклеток часто низкое, и когда личинки появляются, они умирают до экзогенного питания. В этом исследовании описывается третий эксперимент in vivo из серии текущих экспериментов в нашей лаборатории, направленных на замену процедуры PE высокостабильными рекомбинантными гонадотропинами, специфичными для угрей (Peñaranda et al, 2018) для улучшения качества гамет и репродуктивного успеха. В более раннем исследовании нам удалось полностью вызреть европейского угря и получить икру хорошего качества путем обработки рекомбинантными гонадотропинами, но личинки не вылупились (Palstra et al., 2019). В этом третьем эксперименте in vivo мы стимулировали половое созревание обработкой (i) CPE, (ii) рекомбинантным FSH (recFSH) с последующим CPE и (iii) recFSH с последующим рекомбинантным LH (recLH), и сравнили эффекты на репродуктивный успех. Кроме того, чтобы сфокусировать исследование на дозе и влиянии рекомбинантного ЛГ на ускорение созревания ооцитов, мы создали систему in vitro и сравнили recLH с CPE в качестве контроля.

Материалы и методы

Для испытания in vivo экспериментальные угри были феминизированы, подвергнуты моделированию миграции (Mes et al., 2016) и обработаны стероидным имплантатом (Thomson-Laing et al., 2019), содержащим 17 метилтестостерона и E2. Затем тридцать угрей были разделены на три группы и обработаны, как описано в таблице 1. Созревание ооцитов ускорялось путем инъекции CPE или инъекции recLH (таблица 1). Овуляция угрей во всех группах вызывалась инъекцией DHP (2 мг / кг). Угрей отделяли от икры, которую затем оплодотворяли и выращивали.

Для испытания in vitro экспериментальных угрей феминизировали, имитировали миграцию и лечили стероидным имплантатом. Десяти самкам еженедельно вводили СРЕ для индукции роста ооцитов. Непосредственно перед бустером CPE была извлечена ткань яичника (~ 5 г) и сохранена в ледяной аквакультуральной среде. После того, как ооциты были диспергированы с помощью пипетки кусочков яичника, приблизительно 60 ооцитов помещали на лунку в трех экземплярах на обработку в 24-луночную культуру, содержащую 1 мл безгормональной среды и 1 мл среды с добавлением обработки (CPE: 1,25, 12,5 и 125 мкг. / мл; RecLh: 10, 100, 1000 нг / мл). Непосредственно перед инкубацией из ооцитов брали пробы для микроскопии, гистологии, RTPCR и анализа среды для измерения DHP. Затем культурные планшеты инкубировали при 16 ° C в течение 12 и 18 часов. После инкубации для тех же целей брали образцы ооцитов.

Результаты и обсуждение

Из десяти угрей, которых обрабатывали CPE in vivo, один угорь погиб во время процедуры, семь созрели через 7-9 недель, два - через 12-13 недель. Четыре из этих угрей были способны к сцеживанию икры, и два угря дали личинки, которые выжили до 6 и 18 дней после выклева (таблица 2). Из десяти угрей, которым вводили рекФСГ и ЦПЭ, четыре угря умерли во время процедуры, а другие созрели намного позже, через 15–22 недели. Два из этих угрей были готовы к сцеживанию икры, и один угорь дал личинки (таблица 2). Из десяти угрей, которых обрабатывали recFSH и recLH, три угря погибли во время созревания, другие также созрели через 15–22 недели. Три угря можно было сцедить, и один угорь дал личинок (таблица 2). Три угря, которых лечили рекФСГ, умерли после инъекции DHP со значениями GSI 75, 77 и 80, которые огромны по сравнению с обычными средними значениями 40-50 после процедуры CPE.

В настоящее время проводятся анализы исследования in vitro, и результаты будут представлены.

Благодарности: Авторы благодарят фонд ДЮПАН; Министерство экономики Нидерландов и Европейского Союза, Европейский фонд морского судоходства и рыболовства и партнеры международного консорциума EELRIC (www.eelric.eu).

Использованная литература

Peñaranda, DS, Gallego, V., Rozenfeld, C., Herranz-Jusdado, JG, Pérez, L., Gómez, A., Giménez, I., Asturiano, JF, 2018. Использование специфических рекомбинантных гонадотропинов для стимуляции сперматогенеза и спермия у европейского угря (Anguilla anguilla). Териогенология 107, 6–20.

Пальстра, А.П., Хименес Небот, И., Жаннет, П., Локман, П.М., Свинкельс, У., Хайнсбрук, Л.Т.Н., 2019. Тестирование рекомбинантных гонадотропинов для размножения европейского угря (Ангилья ангилья), предварительно обработанного феминизацией, имитацией миграции и стероидными имплантатами. Аквакультура Европа, 7-10 октября, Берлин (Германия).Мес, Д., 

Диркс, Р.П., Палстра, А.П., 2016. Имитация миграции в имитируемых фототермических условиях усиливает сексуальное созревание выращенного европейского угря (Anguilla anguilla). Аквакультура 452, 367–372.

Томсон-Лэйнг, Г., Дамстегт, Э.Л., Нагата, Дж., Иджири, С., Адачи, С., Тодо, Т., Хирамацу, Н., Локман, П.М., 2019. Синергетическое действие эстрадиола и 11-кетотестостерона на физиологию вителлогенина у короткоперого угря (Anguilla australis). Биол. Репрод. 100, 1319–1332.

_____________

*Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) и лютеинизирующий гормон (ЛГ) - ред.

Источник: Сборник статей Аквакультура Европы, 2021 г, стр. 607-608